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01支原體(tǐ)簡介

支原體(tǐ)( Mycoplasma)屬于柔膜體(tǐ)綱，是介于細菌和病毒之間的一類無細胞壁的原核細胞微生物(wù)，是已知最小(xiǎo)的自我複制的原核生物(wù)。能(néng)通過濾菌器，大小(xiǎo)為(wèi)0.1～0.3微米。

支原體(tǐ)廣泛存在于人和動物(wù)體(tǐ)内，大多(duō)不緻病，對人緻病的支原體(tǐ)主要有(yǒu)肺炎支原體(tǐ)、溶脲脲原體(tǐ)、人型支原體(tǐ)、生殖器支原體(tǐ)等。

支原體(tǐ)是細胞污染物(wù)中(zhōng)比較常見的一種，細胞受支原體(tǐ)污染程度較輕時，不會表現出明顯的症狀，可(kě)是一旦這種潛伏的污染爆發時，細胞會大量脫落，細胞培養液會變渾濁。

支原體(tǐ)污染可(kě)能(néng)來自操作(zuò)人員和細胞培養用(yòng)原材料，如血清和胰蛋白酶，也可(kě)能(néng)來自于本身已被污染的細胞系和毒種。細胞受支原體(tǐ)污染後，功能(néng)和活性都會受到影響，會帶來不可(kě)靠的實驗結果和不安(ān)全的細胞制品，因此對細胞進行支原體(tǐ)檢測十分(fēn)關鍵。

02支原體(tǐ)檢測相關法規概覽

支原體(tǐ)檢測屬于監管要求的一部分(fēn)，支原體(tǐ)檢測方法在全球範圍内的一些藥典、法規和指導文(wén)件中(zhōng)均有(yǒu)說明。針對生物(wù)制藥産(chǎn)品支原體(tǐ)檢測的檢測指導方針包括以下内容：

• 中(zhōng)國(guó)藥典2020版三部：生物(wù)制品生産(chǎn)檢定用(yòng)動物(wù)細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制

• 中(zhōng)國(guó)藥典2020版三部：3301 支原體(tǐ)檢查法

• 歐洲藥典 2.6.7：Mycoplasmas

• 美國(guó)藥典 <63>：Mycoplasma Tests

法規要求必須證明用(yòng)于生物(wù)制品生産(chǎn)的細胞基質(zhì)不含外源因子，包括支原體(tǐ)。支原體(tǐ)污染檢測必須在産(chǎn)品開發的各個階段進行，包括原材料、細胞、病毒種子庫、未加工(gōng)的收獲液材料和最終産(chǎn)品。

ATCC支原體(tǐ)菌株

在中(zhōng)國(guó)藥典2020版三部：3301 支原體(tǐ)檢查法中(zhōng)，明确标明了支原體(tǐ)檢測時使用(yòng)的菌株為(wèi)ATCC來源的菌株，産(chǎn)品信息如下：

03支原體(tǐ)檢測方法

1、分(fēn)離培養法

圖片來自網絡

• 分(fēn)離培養法是支原體(tǐ)檢測的金标方法，其檢測精(jīng)确度最高；

• 這種方法是從可(kě)疑的細胞培養體(tǐ)系中(zhōng)取樣，并接種到最适宜支原體(tǐ)生長(cháng)的瓊脂平闆上。如果樣本中(zhōng)含有(yǒu)支原體(tǐ)，它們就會在這種瓊脂平闆上瘋狂生長(cháng)，最終形成明顯可(kě)見的特征性菌落。分(fēn)離培養法基本不會出現假陰性結果，因此被譽為(wèi)支原體(tǐ)檢測金标準；

• 不過分(fēn)離培養法也存在兩個弊端，一是檢測時間太長(cháng)，支原體(tǐ)要長(cháng)出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可(kě)以檢測絕大多(duō)數支原體(tǐ)種類，分(fēn)離培養法也有(yǒu)力所不及的時候，例如支原體(tǐ)M. hyorhinis。

2、DNA檢測（熒光染色）

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• DNA檢測需要将可(kě)疑樣品與指示細胞共同培養，因此一般需要幾天時間；

• DNA檢測所用(yòng)的指示細胞通常是細胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細胞，如果原樣本中(zhōng)含有(yǒu)支原體(tǐ)，那麽當細胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時，就可(kě)以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒；

• 分(fēn)離培養法用(yòng)來檢測支原體(tǐ)M. hyorhinis菌株并不可(kě)靠，而DNA法可(kě)以準确的将其檢測出來。

3、PCR法

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• PCR法也可(kě)以檢測M. hyorhinis菌株，PCR法檢測支原體(tǐ)隻需幾個小(xiǎo)時，是最快但也是最不靈敏的支原體(tǐ)檢測方法；

• 該方法采用(yòng)針對支原體(tǐ)DNA的引物(wù)用(yòng)PCR檢測可(kě)疑樣本，其中(zhōng)PCR引物(wù)通常針對支原體(tǐ)的16S rRNA基因。在凝膠電(diàn)泳過程中(zhōng)，支原體(tǐ)DNA會顯示為(wèi)特異性條帶，以此指示支原體(tǐ)的存在。PCR法可(kě)以檢測大多(duō)數支原體(tǐ)，但謹慎起見最好同時使用(yòng)另一種檢測方法來進行驗證。

ATCC廣譜支原體(tǐ)檢測試劑盒：

ATCC廣譜支原體(tǐ)檢測試劑盒---來自于細胞培養專家ATCC，用(yòng)PCR方法，對支原體(tǐ)DNA進行常規檢測的試劑盒。

這個試劑盒中(zhōng)包含了可(kě)以結合16SrRNA基因的廣譜PCR引物(wù)，并通過降落PCR（touch down PCR）方法提高試劑盒的靈敏度，且用(yòng)特異性的耐熱DNA聚合酶來提高試劑盒的特異性。這種方法符合歐洲藥典2.6.7的标準 (Biologicals38,March 2010)

更多(duō)産(chǎn)品相關産(chǎn)品信息可(kě)參考ATCC網站：

https://www.atcc.org/search#q=Mycoplasma%20&sort=relevancy&numberOfResults=24

訂購(gòu)熱線(xiàn)：010-84415766；

郵箱：atcc@sinozhongyuan.com