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IgGZERO（EndoS）和GlycINATOR（EndoS2）都是内切糖苷酶，均可(kě)快速水解IgG 的Fc 結構域上的N- 聚糖。

但是你知道嗎？哪種内切糖苷酶可(kě)以去除人IgG上的所有(yǒu)高甘露糖型聚糖？哪種内切糖苷酶對雜合型聚糖更有(yǒu)效呢(ne)？

别着急，咱們接着往下看～

GlycINATOR（EndoS2）

GlycINATOR（EndoS2）是一種内切糖苷酶，可(kě)以迅速水解IgG中(zhōng)的Fc結構域的N-聚糖結構。

GlycINATOR在第一個乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）後切除N-聚糖。GlycINATOR可(kě)以有(yǒu)效地從IgG中(zhōng)去除高甘露糖型，以及複合型和雜合型的Fc 聚糖。該反應可(kě)在生理(lǐ)條件下快速、溫和地進行。該酶作(zuò)用(yòng)于天然IgG，并且不需要去垢劑。

GlycINATOR通過減少由補體(tǐ)結合或交叉反應性引起的各種免疫測定中(zhōng)的副作(zuò)用(yòng)而成為(wèi)一種有(yǒu)效的工(gōng)具(jù)。

劃重點

      · 對高甘露糖型和平分(fēn)糖型有(yǒu)效

      · 快速去糖基化，操作(zuò)時間僅30分(fēn)鍾

凍幹粉——

GlycINATOR水解Fc的N-聚糖，包括高甘露糖型和平分(fēn)型聚糖。該酶成品為(wèi)凍幹制劑，可(kě)以用(yòng)于2 mg IgG的去糖基化反應。

固定化的GlycINATOR離心柱，GlycINATOR酶通過共價結合在瓊脂糖小(xiǎo)球上。這種固定化的GlycINATOR可(kě)以對Fc的N-聚糖去糖基化，而最終産(chǎn)品中(zhōng)不會含有(yǒu)這種酶。

IgGZERO（EndoS）

IgGZERO（EndoS）是對天然IgG 具(jù)有(yǒu)獨特特異性的内切糖苷酶。它對于Fc 結構域上的N- 聚糖具(jù)有(yǒu)特異性，在第一個乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）之後切除N- 聚糖。

該酶僅水解IgG上的N-聚糖，即使在其他(tā)糖基化蛋白質(zhì)存在的情況下。該反應在生理(lǐ)條件下快速和溫和地進行，不需要去垢劑。

該酶通過減少由補體(tǐ)結合或交叉反應性引起的各種免疫測定中(zhōng)的副作(zuò)用(yòng)而成為(wèi)一種有(yǒu)效的工(gōng)具(jù)。

劃重點

     · 特異作(zuò)用(yòng)于Fc聚糖

     · 快速去糖基化，操作(zuò)時間僅30分(fēn)鍾

     · 血清中(zhōng)也有(yǒu)活性

凍幹粉——

IgGZERO 特異性水解IgG F c結構域上的N-聚糖。該酶以凍幹粉的形式供應。

deGlycIT是固定在瓊脂糖上的IgGZERO，可(kě)以快速和選擇性去除Fc上的N-聚糖。提供的離心柱預先填充有(yǒu)固定化IgGZERO，可(kě)用(yòng)于少量甚至高達數百mg抗體(tǐ)的去糖基化。

GlycINATOR（EndoS2）   VS    IgGZERO（EndoS）

IgGZERO(EndoS)GlycINATOR(EndoS2)快速水解IgG 的Fc 結構域上的N-聚糖。 

GlycINATOR 可(kě)以去除人IgG 上的所有(yǒu)高甘露糖型聚糖，但是IgGZERO不能(néng)。兩種酶均可(kě)除去複雜型聚糖，而GlycINATOR 對雜合型聚糖更有(yǒu)效。

西妥昔單抗（Cetuximab）的去糖基化

為(wèi)了比較IgGZERO和GlycINATOR對N-聚糖的特異性，分(fēn)别用(yòng)這兩種酶對西妥昔單抗進行去糖基化。抗體(tǐ)去糖基化後，用(yòng)FabRIC ATOR水解為(wèi)F（ab ’）2和Fc片段。西妥昔單抗含有(yǒu)高甘露糖型聚糖。

反應30分(fēn)鍾後，這些高甘露糖型聚糖可(kě)以被GlycINATOR切除，但IgGZERO卻不能(néng)。

用(yòng)反相高效液相色譜（RP-HPLC）分(fēn)析去糖基化

The removal of glycans on Fc is seen as a shift in retention time in reversed phase chromatography. Chromatogram A: Fc with intactN-glycans, Chromatogram B: IgG deglycosylated with GlycINATOR, Chromatogram C: IgG deglycosylated with IgGZERO.

看完這篇内容，相信大家對IgGZERO(EndoS)和GlycINATOR（EndoS2）有(yǒu)了更深刻的了解，實驗前可(kě)不要選錯了内切糖苷酶哦~