N

各類細胞産(chǎn)品是我們做實驗研究的基礎。一支小(xiǎo)小(xiǎo)的細胞，從ATCC細胞庫，不遠(yuǎn)萬裏來到中(zhōng)國(guó)，應該如何正确進行複蘇、培養呢(ne)？請随小(xiǎo)編為(wèi)您逐一講解。

一、溫馨小(xiǎo)提醒

凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中(zhōng)使用(yòng)幹冰保持低溫。收到凍存細胞後，可(kě)以立即解凍複蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）後進行細胞培養。如果不立即複蘇培養細胞，必須将細胞凍存管放置于液氮罐存儲。請不要将細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會迅速下降。

二、産(chǎn)品說明書

 ATCC每個細胞株都有(yǒu)一份産(chǎn)品說明書（product sheet），其中(zhōng)包含細胞株的信息和詳細的操作(zuò)指南。此外，ATCC可(kě)以提供具(jù)體(tǐ)生産(chǎn)批次的檢測報告（COA），其中(zhōng)包含批次的特定信息，如每隻凍存管中(zhōng)細胞的數量，微生物(wù)污染的檢測結果等。細胞株的所有(yǒu)詳細介紹可(kě)以在 ATCC 網站找到，産(chǎn)品說明書和COA可(kě)以從ATCC網站下載。

三、操作(zuò)注意事項

     1.ATCC推薦在操作(zuò)凍存的ATCC細胞株時使用(yòng)手套，工(gōng)作(zuò)服和防護面具(jù)以避免任何事故發生。

      2.檢查包裝(zhuāng)，查看是否有(yǒu)任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體(tǐ)狀。

      3.将凍存的ATCC細胞株從有(yǒu)幹冰的包裝(zhuāng)中(zhōng)取出，立即複蘇培養，或迅速轉移放置在液氮罐存儲。

四、細胞複蘇步驟

1.先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶，及産(chǎn)品說明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中(zhōng)預先溫熱細胞培養基。(請參閱:*注1)

2.小(xiǎo)心取出裝(zhuāng)有(yǒu)細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，将凍存管蓋以下的部分(fēn)置于37℃水浴中(zhōng)并輕微的晃動以幫助解凍。解凍過程應該盡快，大約短于2分(fēn)鍾或待最後一塊小(xiǎo)冰晶體(tǐ)剛融化，就應将細胞凍存管取出水浴。

3.在從水浴中(zhōng)取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用(yòng)無菌紙巾或紗布試幹。之後的操作(zuò)步驟都應該遵循在無菌條件下生物(wù)安(ān)全櫃中(zhōng)嚴格操作(zuò)。

4. 小(xiǎo)心擰開凍存管的頂部，将管内容物(wù)用(yòng)1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無菌離心管中(zhōng)。離心5到7分(fēn)鍾(125×g),小(xiǎo)心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丢失細胞沉澱。将細胞沉澱重懸于配好的完全培養基中(zhōng)。将細胞懸液轉移到培養容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分(fēn)布。生長(cháng)較慢的細胞株可(kě)重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長(cháng)較快的細胞株可(kě)重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC網站有(yǒu)各個細胞株的具(jù)體(tǐ)生長(cháng)狀況及培養方法記載。

5. 将細胞培養容器置于細胞培養箱，在溫度37℃, 二氧化碳濃度5%的培養條件下進行孵育。細胞培養24小(xiǎo)時後應在顯微鏡下觀察細胞形态和生長(cháng)狀況。(請參閱:*注2)

*注1:雖然大多(duō)數細胞株可(kě)以在一種以上的培養基中(zhōng)生長(cháng)，但細胞的特征有(yǒu)可(kě)能(néng)會在更換不同種培養基時發生變化。為(wèi)保證最佳效果，請從細胞培養一開始就使用(yòng)ATCC推薦指定的培養基。

*注2:某些細胞株，如雜交瘤株，可(kě)能(néng)需要幾天的時間才從凍存狀态下完全恢複正常生長(cháng)。在細胞複蘇培養第一天可(kě)能(néng)會呈現較低的細胞活力并産(chǎn)生一些細胞碎片。度過這一時期後，細胞會恢複并進入指數增長(cháng)期。

為(wèi)了确保細胞活力、遺傳基因型穩定和表型的穩定，細胞株的培養需要保持在對數期。這意味着需要定期對細胞進行傳代。并且注意在細胞進入生長(cháng)平台期之前，即單層細胞100%彙合長(cháng)滿前或懸浮細胞達到其推薦的最大細胞密度之前，要進行細胞傳代。監測細胞生長(cháng)和繪制每個細胞株的生長(cháng)曲線(xiàn)都有(yǒu)助于确定細胞株的生長(cháng)特性。

注: 細胞培養請嚴格參考其說明書和質(zhì)檢報告COA中(zhōng)信息

更多(duō)細胞複蘇秘籍，請觀看我們官方b站視頻：