機體(tǐ)在受到病原體(tǐ)攻擊後産(chǎn)生相應的免疫反應，如免疫細胞亞群、細胞因子水平的變化，可(kě)作(zuò)為(wèi)臨床診療參考指标；在免疫反應檢測過程中(zhōng)，流式細胞儀是必不可(kě)少的工(gōng)具(jù)之一。今天就來介紹一款服務(wù)在疫情第一線(xiàn)的流式細胞儀。

1 Guava—傳染病研究中(zhōng)發揮的作(zuò)用(yòng)

Luminex公(gōng)司旗下Guava® easyCyte™ 微毛細管流式細胞儀具(jù)有(yǒu)靈敏度高、廢液少(ml級)等特點，在流行病特别是急性傳染病研究中(zhōng)具(jù)有(yǒu)明顯優勢。

埃博拉疫情期間，Guava多(duō)參數流式細胞儀就已經投入到了疫區(qū)第一線(xiàn)。科(kē)學(xué)家在《Nature》雜志(zhì)上發文(wén)，利用(yòng)Guava 8在位于幾内亞埃博拉疫區(qū)的流動實驗室中(zhōng)建立了對患者的持續跟蹤體(tǐ)系，利用(yòng)PBMC樣本評估患者自發病到治愈/死亡期間不同階段的免疫反應，從而在死亡患者體(tǐ)内發現了一類特異性的T細胞亞群，并提出了利用(yòng)已有(yǒu)藥物(wù)靶向這類T細胞進行治療的可(kě)能(néng)性[ref 1]。

劃重點啦！

Guava在傳染病研究中(zhōng)的優勢

1. 廢液少：每運行8小(xiǎo)時僅産(chǎn)生 <50 ml的廢液量，适用(yòng)于感染性材料的研究；

2. 體(tǐ)積小(xiǎo)：結構緊湊，整體(tǐ)化程度高，便于運輸，安(ān)裝(zhuāng)、維護簡便；

3. 性能(néng)穩定：确保産(chǎn)生的數據質(zhì)量。

如您有(yǒu)流式的科(kē)研需求，歡迎聯系我們

2 Guava—病毒顆粒檢測

常規檢測病毒和/或病毒顆粒的透射電(diàn)子顯微鏡、ELISA、病毒滴定等方法無法分(fēn)析各類病毒比例或區(qū)分(fēn)感染性與非感染性病毒顆粒。

流式細胞儀能(néng)夠直接檢測單個病毒顆粒及其特征。Landowski等人單獨使用(yòng)抗體(tǐ)直接檢測病毒樣顆粒(NiVLPs)，開發出新(xīn)的流式病毒學(xué)研究工(gōng)具(jù)，可(kě)高通量測量病毒動力學(xué)，研究病毒顆粒表面糖蛋白比例[ref 2]。

作(zuò)者利用(yòng)Guava 8HT檢測發現，相較于下圖A中(zhōng)PBS緩沖液，圖B中(zhōng)VLPS病毒FSC/SSC信号可(kě)以很(hěn)好的與背景分(fēn)開。圖C-F顯示分(fēn)别連接了1種、2種和3種不同病毒糖蛋白片段後VLPs在四象限門内的表達變化。

Guava的超高靈敏度确保在針對如病毒等微小(xiǎo)顆粒的檢測中(zhōng)，不僅能(néng)夠對目标實現清晰分(fēn)群，還可(kě)以對病毒入侵細胞的機理(lǐ)進行分(fēn)析研究。

3 Guava—免疫分(fēn)型研究 

免疫細胞計數和分(fēn)型是評估病毒感染後機體(tǐ)免疫反應的重要參數，流式則是必不可(kě)少的檢測手段。

武漢協和醫(yī)院的研究團隊發表在預印本平台MedRxiv上的一篇文(wén)章描述了不同疾病嚴重程度的新(xīn)冠患者外周血淋巴細胞亞群比例變化[ref 3]。分(fēn)析顯示：

1. 重症患者入院時外周血淋巴細胞的絕對計數顯著低于輕症患者，而白細胞和中(zhōng)性粒細胞的絕對計數明顯高于入院時的輕症患者(下圖)。

2. 與輕症患者相比，重症患者CD3+ T細胞、CD4+和CD8+T細胞亞群計數持續下降，而B細胞和NK細胞計數無顯著性差異(下圖)。

3. 進一步評估中(zhōng)性粒細胞/CD8+T細胞比例(N8R)、中(zhōng)性粒細胞/淋巴細胞比例(NLR)、嗜中(zhōng)性粒細胞計數(NEC)、白細胞計數這4個變量。詳細統計分(fēn)析結果顯示N8R可(kě)作(zuò)為(wèi)監測重症患者的預後指标。

Tips:

Guava免疫分(fēn)型多(duō)色實驗方案

1. 取10 μl 成人全血，與抗CD45，CD3，CD4，CD8，CD16，CD56，CD19，CD45 RA和CD62L抗體(tǐ)混合，室溫孵育20分(fēn)鍾；

2. 加入180 μl 裂解液，室溫反應15 分(fēn)鍾，上機檢測。

3. 圈門：

• CD45+的淋巴細胞進一步用(yòng)SSC vs. CD3圈門；

• T細胞(CD3+/CD45+)再用(yòng)CD4 vs. CD8圈門；

• CD4+和CD8+的T細胞分(fēn)别用(yòng)CD45RA和CD62L區(qū)别原始和記憶細胞。

• CD3-細胞進一步分(fēn)為(wèi)CD19+的B細胞和CD16+/CD56+的NK細胞。

如圖所示，T、B、NK各細胞亞群清晰可(kě)見，并可(kě)對各細胞亞群進行絕對計數，提供準确檢測結果。

Reference：

1. Paula Ruibal et al. Nature, 533 (2016): 100–104.

2. Matthew Landowski et al. Journal of Virology, 88 (2014): 14197–14206.

3. Jing Liu et al. Longitudinal characteristics of lymphocyte responses and cytokine profiles in the peripheral blood of SARS-CoV-2 infected patients. medRxiv, doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.16.20023671

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