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Bio-techne|細胞因子從 U 到 μg 換算,看我乾坤大挪移

在文(wén)獻中(zhōng),細胞因子的檢測結果和用(yòng)量常用(yòng) U/mL 或 IU/mL 表示。而 R&D Systems® 的蛋白,單位一般是 μg。U 是什麽?和 IU 之間有(yǒu)什麽差别?它們又(yòu)是怎麽與 μg 進行換算的呢(ne)?

U 的定義

首先,U 是蛋白活性單位,用(yòng)于計量蛋白本身的生物(wù)學(xué)活性。活性單位指在最适條件下,單位時間内産(chǎn)生單位生物(wù)學(xué)效應的蛋白量。

以酶為(wèi)例,1961 年,國(guó)際生物(wù)化學(xué)學(xué)會酶學(xué)委員會提出采用(yòng)統一的「國(guó)際單位」(IU)來表示酶的活力,在最适條件下,每分(fēn)鍾内催化 1 微摩爾(μmol)底物(wù)轉化為(wèi)産(chǎn)物(wù)或轉化底物(wù)中(zhōng) 1 微摩爾的有(yǒu)關基團所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。

比如大家最熟悉也是臨床最常見的谷草(cǎo)轉氨酶(天冬氨酸氨基轉移酶,AST),8.47 U/L=8.47 IU/L,也就是說,每升血清中(zhōng),含有(yǒu)能(néng)在 1 分(fēn)鍾内使 8.47 μmol 的氨基轉移的 AST。

那麽,IU 與 μg 又(yòu)該如何換算呢(ne)?這就要引入比活性的概念。

活性與比活性

我們知道蛋白都有(yǒu)複雜的空間結構和翻譯後修飾,僅僅保證一級結構是無法确保蛋白活性的。而體(tǐ)現重組蛋白産(chǎn)品活性的重要指标,就是比活性。

比活性是指單位質(zhì)量蛋白的生物(wù)學(xué)活性單位,通常用(yòng) U/μg 或 μmol/min/μg 表示。還是以酶為(wèi)例,在最适條件下,如果 1 μg 酶可(kě)以在 1 分(fēn)鍾内催化 1μmol 的底物(wù),那麽其比活性就是 1U/μg(或 μmol/min/ug)。

這是重組蛋白的一項重要指标。進行比活性項目的檢測,不僅可(kě)以反映産(chǎn)品生産(chǎn)工(gōng)藝的穩定情況,而且可(kě)以比較不同表達體(tǐ)系、不同生産(chǎn)廠家生産(chǎn)同一産(chǎn)品的品質(zhì)情況。比活性高說明産(chǎn)品的生産(chǎn)工(gōng)藝更先進、純度更高、質(zhì)量更優。

然而蛋白的作(zuò)用(yòng)千變萬化,在不同的時間空間對于不同的細胞很(hěn)可(kě)能(néng)會有(yǒu)不同的作(zuò)用(yòng)。如何統一呢(ne)?

世界衛生組織聯合美國(guó)國(guó)家生物(wù)标準及控制研究所(NIBSC)給出了一系列蛋白的國(guó)際标準品,以 TNF-α為(wèi)例,該标準品的比活性為(wèi) 43,000 IU/mg。有(yǒu)了标準品,我們就能(néng)對目标蛋白進行生物(wù)學(xué)标定。

R&D Systems® 産(chǎn)品活性換算

R&D Systems® 的細胞因子産(chǎn)品大多(duō)經過國(guó)際标準品的标定。這樣不僅保證了細胞因子的生物(wù)學(xué)活性,更保證了其與國(guó)際标準品之間的溯源性。通過下方鏈接,便可(kě)查到 R&D Systems® 經過标定的細胞因子的比活性。

https://www.rndsystems.com/cn/resources/technical-information/unit-conversion-table

下表既有(yǒu)相關參考标準品的貨号和比活性,又(yòu)有(yǒu)用(yòng)于活性驗證的細胞系的信息。在最後一列,列出了 1 μg 蛋白與活性(U 或 IU)的換算方法。

比如人 EGF 蛋白産(chǎn)品(貨号 236-EG),1 μg=1.4*103 U,如果文(wén)獻中(zhōng)所用(yòng)的濃度為(wèi) 100 U/mL,換算到該産(chǎn)品的質(zhì)量濃度就是 100/1400=0.07 μg/mL。

 

以上文(wén)字和圖片來源于Bio-techne

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