提及多(duō)因子的定量檢測，越來越多(duō)的小(xiǎo)夥伴會第一個想到 Luminex 技(jì )術。Luminex 基于微球設計原理(lǐ)，可(kě)以在 1 張 96 孔闆中(zhōng)定量檢測多(duō)達 100 種分(fēn)析物(wù)，僅需少量樣本，節約時間、經費，可(kě)謂一舉多(duō)得。

R&D Systems® 擁有(yǒu) Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 兩個産(chǎn)品系列，均基于帶有(yǒu)顔色編碼的微球，這些微球表面包被了識别不同目标分(fēn)析物(wù)的特異性抗體(tǐ)。當預包被的微球與待檢樣本孵育時，分(fēn)析物(wù)被微球捕獲，經由生物(wù)素标記的特異性檢測抗體(tǐ)混合物(wù)識别，加入鏈黴親和素 - PE 熒光素底物(wù)後發光并進行定量檢測。

01  樣品粘稠，未有(yǒu)效稀釋
解決方法：測定前，如果是凍存的血清 / 血漿樣品，第一步需将樣品充分(fēn)解凍（如果樣本包含碎片的話也會影響數據的讀取）。建議在加樣前，将樣本進行 16,000 x g 離心 4 分(fēn)鍾，特殊情況下可(kě)能(néng)要離心更長(cháng)的時間，再用(yòng) Calibrator diluent 按照建議的稀釋比對樣本進行稀釋。

02  進樣針孔堵塞，進樣針高度不正确
解決方法：以上兩種情況都會導緻沒有(yǒu)充足的微球進入，前者需用(yòng)超聲的方法清洗針孔，如有(yǒu)需要進行替換；後者需确定進樣針的高度并調整至合适位置。

也可(kě)以進入維護頁(yè)面，點擊 Cmds&Routines，使用(yòng) 0.1 N NaOH 運行深度清洗。

03  操作(zuò)有(yǒu)誤，清洗步驟中(zhōng)孔闆未附磁力架
解決方法：這是新(xīn)手常常會出現的失誤。對于磁珠形式的微球，切記清洗時整個過程都要附有(yǒu)磁力架，确定磁力架正确地結合在微孔闆上，洗闆時磁力架應置于微孔闆底部，棄去洗滌液前應靜置 1 分(fēn)鍾。不要吸幹，以防止磁珠丢失。

如果磁珠數量少，建議最好不要用(yòng)自動洗闆機清洗，我們發現自動洗闆機清洗可(kě)能(néng)會造成磁珠聚集，從而影響其數量。

​在實際的 Luminex 實驗操作(zuò)中(zhōng)，有(yǒu)客戶經常碰到微球數少于 50 個甚至隻有(yǒu)幾個的問題，極大地影響了實驗結果，其可(kě)能(néng)的原因和解決方法有(yǒu)哪些呢(ne)？

如下為(wèi)正确的手動洗闆方式：

除了上述三點外，還要一些細節需要注意

●确保儀器已正确校準，建議每周進行儀器校準，每天驗證一次。若儀器使用(yòng)頻率不高，則需要在每次實驗前進行校準和驗證；

●在實驗當天使用(yòng)驗證試劑盒确定儀器功能(néng)運行正常；

●設定微球收集數（events/microparticle）為(wèi) 50，并選擇正确的微球類型（通常為(wèi)磁珠），保證微球數量收集充分(fēn)以獲得準确的統計學(xué)結果；

●使用(yòng) 0.12" orbit（3mm 軌道半徑）水平微孔闆振蕩器，确保振蕩器速度符合說明書要求。

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