免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫細胞化學(xué)（ICC）和免疫熒光（IF），姑且稱為(wèi)定位檢測抗原表達的「三駕馬車(chē)」，是生物(wù)學(xué)研究中(zhōng)常用(yòng)的免疫學(xué)實驗。

三種方法原理(lǐ)相似，易于混淆。實驗人員在挑選抗體(tǐ)産(chǎn)品時常常有(yǒu)這樣的困惑，某一種應用(yòng)的抗體(tǐ)是否也适用(yòng)于另外兩種實驗？是，也不是。具(jù)體(tǐ)要視不同品牌而定，下面讓我們為(wèi)您一一解惑：

「三駕馬車(chē)」的應用(yòng)有(yǒu)何不同？

首先，我們一起了解下三種檢測方法的區(qū)别。IHC 應用(yòng)的樣本類型是組織，ICC 的樣本類型是細胞，而 IF 則是采用(yòng)熒光标記抗體(tǐ)實現組織/細胞中(zhōng)目的蛋白的定位。其中(zhōng)，IHC 更可(kě)以根據組織切片的形式分(fēn)為(wèi) IHC-P（石蠟切片）及 IHC-Fr（冰凍切片）。

Bio-Techne 的抗體(tǐ)産(chǎn)品選擇的特别之處在于，不會顯示單獨的 IF 應用(yòng)，而是與 ICC 合并為(wèi)一類：ICC/IF。因而，涉及三種檢測方法的應用(yòng)标識主要分(fēn)為(wèi)：ICC/IF，IHC（IHC-P、IHC-Fr）。

左上，IHC：使用(yòng) HIF-1 alpha 抗體(tǐ)（Novus，NB100-105）在人腎髒中(zhōng)染色 HIF-1 alpha；右上，ICC：使用(yòng) 10 µg/mL IRAK4 抗體(tǐ)（Novus，NBP1-77231）和 HRP 偶聯的二抗在 K562 細胞中(zhōng)檢測到 IRAK4 的表達。細胞用(yòng) DAB 染色（棕色），細胞核用(yòng)蘇木(mù)精(jīng)（藍色）複染。左下，基于組織的 IF：使用(yòng) 1 μg/mL 的 GAP-43 抗體(tǐ)（Novus，NB300-143）及 AlexaFluor® 488 标記的二抗，檢測 E15.5 小(xiǎo)鼠胚胎的石蠟切片中(zhōng) GAP-43 的表達。DAPI 用(yòng)于細胞核複染；右下，基于細胞的 IF：使用(yòng) 15 µg/mL 的 IRAK4 抗體(tǐ)（R&D Systems，AF3919）及 NorthernLights™ 557 偶聯的二抗（紅色）在 THP 1 細胞中(zhōng)檢測 IRAK4。用(yòng) DAPI（藍色）對細胞核進行染色。

如何挑選合适的 IHC/ICC/IF 抗體(tǐ)？

在了解三種檢測方法的差别之後，我們回到文(wén)章開頭的問題，一種抗體(tǐ)是否可(kě)以在三種檢測方法中(zhōng)通用(yòng)？換句話說，如何挑選适用(yòng)于自身實驗的抗體(tǐ)呢(ne)？

Bio-Techne 旗下兩大抗體(tǐ)品牌 R&D Systems® 與 Novus Biologicals®，在抗體(tǐ)的适用(yòng)範圍（IHC/ICC/IF）描述方面存在差異：

1. R&D Systems® 品牌的抗體(tǐ)在産(chǎn)品頁(yè)面顯示已經驗證的種屬（Species）及應用(yòng) (Applications)，這些應用(yòng)通常在說明書中(zhōng)會有(yǒu)詳細的信息。

[特别注意] R&D Systems® 品牌抗體(tǐ)應用(yòng)中(zhōng) IHC 或者 ICC/IF 隻要有(yǒu)一項，則可(kě)以适用(yòng)于 IHC 及 ICC/IF 的應用(yòng)。一般來說，應用(yòng)中(zhōng)包含「IHC」的抗體(tǐ)同時适用(yòng)于 IHC-Fr 及 IHC-P，除非說明書中(zhōng)另有(yǒu)聲明。

例如，巨噬細胞标志(zhì)物(wù) CD68（貨号 MAB20401）抗體(tǐ)，應用(yòng)欄中(zhōng)僅标出了 ICC/IF，雖然不能(néng)确定一種抗體(tǐ)在每一種組織中(zhōng)都有(yǒu)同樣的表現，但我們可(kě)以證明其對固定抗原的識别，所以也可(kě)應用(yòng)于 IHC 實驗。

溫馨提示：若說明書中(zhōng)沒有(yǒu) IHC 以及 ICC/IF 的應用(yòng)說明，表明我們沒有(yǒu)任何數據來支持相應的應用(yòng)，即不能(néng)保證實驗結果。 

2. 同樣的，Novus Biologicals® 抗體(tǐ)産(chǎn)品頁(yè)面也顯示出所有(yǒu)經過驗證的種屬（Species）及應用(yòng) (Applications)。值得一提的是，除 Novus Biologicals® 實驗室驗證的種屬及應用(yòng)外，部分(fēn)數據也來自于客戶的鼎力支持。

除此之外，還有(yǒu)些抗體(tǐ)包含 (-) 标志(zhì)，代表驗證過為(wèi)陰性的種屬或者應用(yòng)，不建議您再次進行嘗試。

[特别注意] Novus Biologicals® 的 IHC 與 ICC/IF 兩種應用(yòng)不能(néng)通用(yòng)，這一點與 R&D Systems® 的規定有(yǒu)所不同。此外，若有(yǒu)單獨标注 IHC 的子類（IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount），隻驗證用(yòng)于單獨标注的子類，如果隻有(yǒu) IHC 标志(zhì)而無子類标志(zhì)，則适用(yòng)于所有(yǒu)的 IHC 切片類型。即：

• 抗體(tǐ) A 标注了 IHC，則可(kě)以應用(yòng)于 IHC-P、IHC-Fr，未驗證 ICC/IF；
• 抗體(tǐ) B 标注了 IHC，IHC-Fr，則可(kě)以應用(yòng)于 IHC-Fr，未驗證 IHC-P 及 ICC/IF；
• 抗體(tǐ) C 标注了 ICC/IF，則可(kě)以應用(yòng)于 ICC/IF，未驗證 IHC-P 及 IHC-Fr。

以自噬标志(zhì)物(wù) LC3B（NBP2-46892）為(wèi)例，應用(yòng)欄中(zhōng)标出了 ICC/IF，IHC，IHC-P，說明此産(chǎn)品已驗證适用(yòng)于 ICC/IF 和 IHC-P，未驗證 IHC-Fr 實驗。

根據品牌的不同，可(kě)以選擇合适的官方驗證過的抗體(tǐ)。謹記上述小(xiǎo)貼士，開展實驗不用(yòng)愁。

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