微管具(jù)有(yǒu)多(duō)種細胞功能(néng)，包括在有(yǒu)絲分(fēn)裂期間分(fēn)離染色體(tǐ)、維持細胞形态、調控纖毛和鞭毛的擺動以及參與細胞物(wù)質(zhì)的運輸。大量腫瘤化學(xué)療法靶向微管蛋白的組裝(zhuāng)或拆卸過程，強調了微管與腫瘤發生發展的關系。另外，研究表明，微管組裝(zhuāng)或拆卸的失調與神經退行性疾病相關。

從結構上講，微管是由 α-和 β-Tubulin 異二聚體(tǐ)組成中(zhōng)空管狀結構，它們端對端連接形成原纖絲，原纖絲橫向組合構成 25 nm 的微管。與 α-和 β-Tubulin 不同的是 γ-Tubulin，其包含在微管組織中(zhōng)心（MTOC）中(zhōng)。通過與其他(tā)蛋白質(zhì)的結合，γ-Tubulin 充當 α/β-Tubulin 二聚體(tǐ)起始聚合的支架。

微管結構示意圖，圖片來源：biologydictionary.net

特異性示蹤微管蛋白，是解析疾病病理(lǐ)機制、揭秘微管蛋白功能(néng)的重要前提。

Tocris®獨家發布的新(xīn)型微管探針紫杉醇 Janelia Fluor® 646（貨号 6266），可(kě)用(yòng)于微管細胞骨架的直接成像。該探針僅在與微管結合時才發出熒光，因此實驗過程中(zhōng)無需洗脫。

• 紫杉醇是與 Tubulin 結合的二萜，可(kě)促進并穩定 Tubulin 蛋白聚合，這是其具(jù)有(yǒu)抗有(yǒu)絲分(fēn)裂和細胞毒性作(zuò)用(yòng)的原因。熒光染料與紫杉醇的偶聯為(wèi)微管細胞骨架的成像提供了便捷的方法。基于此原理(lǐ)的熒光探針有(yǒu) Flutax 1（貨号 2226）和 Flutax 2（貨号 6254）。

• 新(xīn)型微管探針結合了紅色熒光染料 Janelia Fluor® 646，最大激發波長(cháng)為(wèi) 646 nm；最大發射波長(cháng)為(wèi) 664 nm。Janelia Fluor® 系列熒光染料相較于普通熒光染料，其熒光更明亮，光穩定性更高。最突出的優勢在于其具(jù)有(yǒu)細胞膜通透性，能(néng)夠進行活細胞染色或固定細胞染色，以及細胞内的單分(fēn)子示蹤。

紫杉醇 JaneliaFluor® 646 探針在 COS7 細胞上的應用(yòng)：COS7 細胞用(yòng) 3 µM 紫杉醇 JaneliaFluor® 646 标記，在 37 °C 下放置 1 小(xiǎo)時。在 Leica TCS SP8 共焦激光掃描顯微鏡上成像并拍攝。

附紫杉醇 JaneliaFluor® 646 實驗方案：

1. 在 DMSO 中(zhōng)準備紫杉醇 JaneliaFluor® 646 的儲備溶液。儲備溶液可(kě)以等分(fēn)并在 ≤ -20 °C 的環境下最多(duō)保存 1 個月；
2. 将儲備溶液稀釋到 37 °C 的溫熱培養基中(zhōng)，然後放入預熱的盒子中(zhōng)（用(yòng)于存放于培養箱）。工(gōng)作(zuò)溶液應在同一天制備并使用(yòng)；
3. 以 3 μM 的終濃度應用(yòng)于活細胞檢測，也可(kě)以使用(yòng)較低的濃度，并且應針對不同的實驗優化濃度；
4. 在 37 °C 孵育 1 小(xiǎo)時之後成像。理(lǐ)論上無需洗脫，若選擇洗脫方案，可(kě)在成像前用(yòng) 1x PBS 和 2% 的 BSA 沖洗細胞 3 次，并加入新(xīn)鮮培養基。

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